多色流式抗体是指在流式细胞术中，将多种（通常指3种以上，现代技术可达40-50种）针对不同靶标（抗原）的抗体，分别标记上不同荧光素，混合在一起对单个细胞样本进行同时染色的技术。

多色流式抗体技术组成：三大核心要素

1.抗体

特异性：抗体的核心，决定了你检测的是什么靶蛋白（如CD3、CD4、CD8、CXCR5等）。通常是单克隆抗体，有明确的克隆号。

宿主来源：主要是小鼠、大鼠、兔等。在设计多色panel时，需避免二抗引起的交叉反应。

形式：完整抗体、F(ab‘)₂片段（减少Fc受体非特异性结合）等。

2.荧光素

这是实现“多色"的关键。荧光素受到特定波长的激光激发后，会发射出特定波长的荧光。

仪器配置：必须匹配流式细胞仪的激光器（如488nm蓝、640nm红、355nm紫外等）和检测滤光片。

抗原表达水平：高表达的抗原（如CD45）用较弱荧光素；低表达的抗原（如某些细胞因子、趋化因子受体）用强荧光素（如PE、APC）。

光谱重叠（溢漏）：不同荧光素的发射光谱会有重叠，需要进行荧光补偿。

3.抗体-荧光素偶联物

通过化学方法将荧光素稳定地共价连接到抗体上，形成最终的检测工具。

多色流式抗体 Horizon™ BV421 Mouse Anti-Human CD3

对人外周血淋巴细胞上 CD3 表达的流式细胞术分析（左图）。用 Horizon™ BV421 鼠抗人 CD3 抗体（货号 562426/562427；实线直方图）或 Horizon™ BV421 鼠 IgG1, κ 同型对照（货号 562438；虚线直方图）对人全血进行染色。用  Pharm Lyse™ 裂解缓冲液（货号 555899）裂解红细胞。荧光直方图由具有活淋巴细胞前向和侧向光散射特征的事件得出。流式细胞术使用  FACSCanto™ II 流式细胞仪系统进行。
人扁桃体细胞内 CD3 表达的免疫组织荧光分析（右图）。将人扁桃体冷冻切片（5 微米）用  Cytofix™ 固定缓冲液（货号 554655）固定，用 5% 羊血清和 1% BSA 稀释于 1×PBS 中进行封闭，然后用  Pharmingen™ 纯化小鼠抗人 CD11c 抗体（货号 565805）染色，再用  Horizon™ BV480 山羊抗小鼠 Ig 二抗（货号 564877，伪彩绿色）染色。切片彻·底清洗后，用  Horizon™ BV421 小鼠抗人 CD3 抗体（货号 562426/562427，伪彩红色）和 Alexa Fluor® 488 小鼠抗人 CD19 抗体（货号 557697，伪彩蓝色）染色。图像在标准的落射荧光显微镜上采集。原始放大倍数为 20 倍。

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