信号通路抗体是靶向细胞内信号通路关键蛋白的特异性抗体，广泛应用于免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）、流式细胞术（FCM）等实验，用于检测蛋白的表达水平、定位及磷酸化修饰状态，是研究细胞增殖、分化、凋亡、代谢等生命活动的核心工具。

信号通路抗体是靶向细胞内信号通路关键蛋白的特异性抗体，广泛应用于免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）、流式细胞术（FCM）等实验，用于检测蛋白的表达水平、定位及磷酸化修饰状态，是研究细胞增殖、分化、凋亡、代谢等生命活动的核心工具。  

一、核心作用与分类  

按靶向蛋白功能分类  

信号通路抗体的靶点覆盖细胞内主要信号通路的核心分子，常见通路及对应抗体如下：  

MAPK/ERK通路：靶向ERK1/2、p-ERK1/2（磷酸化激活型）、MEK1/2、p-MEK1/2、Ras、Raf等蛋白的抗体，用于研究细胞增殖、肿瘤发生机制。  

PI3K/Akt/mTOR通路：靶向PI3Kp85、Akt、p-Akt(Ser473/Thr308)、mTOR、p-mTOR等的抗体，与细胞存活、代谢调控、肿瘤耐药性密切相关。  

NF-κB通路：靶向NF-κBp65、p-p65(Ser536)、IκBα、p-IκBα、IKKβ等的抗体，用于炎症反应、免疫调控及肿瘤研究。  

Wnt/β-catenin通路：靶向β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、APC等的抗体，参与胚胎发育、干细胞维持及肠癌等肿瘤发生。  

JAK/STAT通路：靶向JAK1/2/3、STAT3、p-STAT3(Tyr705)、STAT5等的抗体，核心功能是介导细胞因子信号传导，与免疫疾病、肿瘤相关。  

按检测修饰状态分类  

总蛋白抗体：识别蛋白的非磷酸化+磷酸化总形式，用于检测蛋白的整体表达量。  

磷酸化特异性抗体：仅识别蛋白特定磷酸化位点（如p-AktSer473），用于判断信号通路的激活状态——这是信号通路研究的核心抗体类型，因为通路激活往往依赖蛋白的磷酸化修饰。  

二、关键特性与选择要点  

特异性  

需能特异性识别靶点蛋白，不与家族其他蛋白或无关蛋白交叉反应。例如，ERK1/2抗体应区分ERK1（p44）和ERK2（p42），且不与JNK、p38等其他MAPK家族成员结合。  

适用性  

不同实验对抗体的要求不同，需根据应用场景选择：  

WB：优先选择多克隆抗体或高亲和力单克隆抗体，要求条带清晰、无杂带。  

IHC/IF：优先选择单克隆抗体，且需验证抗体适用于固定样本的抗原修复条件。  

磷酸化抗体：需注意样本处理条件——需使用磷酸酶抑制剂（如Na₃VO₄、氟化钠）防止蛋白去磷酸化，保证检测准确性。  

种属反应性  

抗体说明书会标注适用的物种（人、小鼠、大鼠、兔等），例如针对人源Akt的抗体可能不识别小鼠Akt，需提前确认。  

三、常见应用场景  

基础科研：验证信号通路的激活/抑制状态，例如检测药物处理后细胞内p-ERK1/2水平变化，判断药物是否靶向MAPK通路。  

肿瘤研究：通过IHC检测临床肿瘤组织中p-Akt、p-STAT3的表达水平，分析其与肿瘤分期、预后的相关性。  

药物研发：筛选靶向信号通路的抑制剂，例如验证PI3K抑制剂是否能降低细胞内p-Akt的表达。  

四、注意事项  

磷酸化抗体的保存与使用：对温度敏感，需-20℃避光保存，避免反复冻融；实验全程需加入磷酸酶抑制剂，防止样本中磷酸酶降解靶蛋白的磷酸化位点。  

抗体稀释比例：需根据实验类型优化，WB常用稀释比例为1:1000–1:5000，IHC常用1:100–1:500。  

对照设置：实验需设置阳性对照（已知通路激活的细胞/组织）和阴性对照（敲除靶蛋白的细胞/组织），确保结果可靠。