多色流式抗体保存的黄金法则：从避光到温控，细节决定实验成败

　　多色流式抗体是指经过不同荧光染料标记、用于流式细胞术中同时检测多个细胞表面或胞内分子的特异性抗体组合。它是现代高通量免疫表型分析、细胞功能研究及临床诊断的核心工具，广泛应用于免疫学、肿瘤学、干细胞研究和药物开发等领域。

　　其基本原理是：每种抗体特异性识别一种细胞抗原（如CD3、CD4、CD19等），并通过共价偶联不同的荧光素（如FITC、PE、APC、BV421等）进行标记。当多色抗体混合液与细胞孵育后，目标抗原被相应荧光抗体结合，在流式细胞仪多激光激发下，各荧光信号被独立检测，从而实现单细胞水平上多个参数的同步分析。目前高d仪器可支持30色以上的同时检测，极大提升了实验效率与数据维度。

　　多色流式抗体的保存方法：

　　1、未开瓶原液保存（长期）

　　温度：通常要求2~8℃冷藏保存（4℃是最佳平衡点）。严禁冷冻含有荧光素的抗体原液（冰晶会破坏蛋白结构或使荧光染料解离/聚集），除非说明书明确标注“可冻存”。

　　避光：原始包装瓶（常带琥珀色瓶盖或铝箔外包装）必须保持遮光状态，存放在原装盒内，避免实验室顶灯或紫外线照射（荧光素尤其是FITC、Cy系列、串联染料极易光漂白）。

　　直立放置：防止瓶盖密封垫因长时间侧倒接触液体而变形或漏液。

　　2、已开瓶/分装保存（工作期）

　　防止污染：

　　吸取抗体时，使用带滤芯的吸头（防止气溶胶交叉污染）。

　　尽量减少开盖时间，操作完立即盖紧。

　　若抗体浓度较高且使用频繁，可分装（Aliquot）到多个无菌低吸附微量离心管（0.5mL或1.5mL）中，标注名称、克隆、荧光素、浓度、日期。

　　保存条件：

　　已开瓶的母液继续2~8℃保存，通常建议在1~3个月内用完（具体视抗体稳定性而定，可参考说明书）。

　　绝对避免反复置于室温：每次从冰箱取出，用后即放回，不要放在加样台上过久（尤其避免在常温荧光灯下暴露）。

　　添加剂（慎用）：

　　通常无需额外加防腐剂（原液多含0.02%叠氮h钠或ProClin 300），严禁自己添加不明防腐剂。

　　若用于活细胞染色且担心叠氮h钠毒性，需通过缓冲液交换或大量稀释去除，但会缩短保存期（稀释后建议当天或2天内使用）。

　　3、稀释后工作液（Working Solution）保存

　　用染色缓冲液（如PBS+2%~5%FBS/BSA+0.1%叠氮h钠）稀释好的抗体工作液：

　　建议4℃保存，当天或最迟次日用完。

　　若必须稍长时间（如2~3天），需避光且重新离心（briefly spin）去除可能聚集的蛋白，并做阳性对照验证亮度是否下降。

　　切勿冻存工作液（稀释后冷冻几乎必失活）。

　　4、特殊染料类型的额外注意

　　串联染料（Tandem Dyes:PE-Cy7,APC-Cy7,PerCP-Cy5.5等）：

　　对光、热、固定剂（如多聚甲醛）、高浓度叠氮h钠更敏感。

　　保存时尽量避免反复取出温差大的环境，不要暴露在LED蓝光下。

　　若发现荧光信号严重衰减或光谱漂移至单体荧光（如PE-Cy7只剩PE峰），说明能量转移失败，应丢弃。

　　FITC：易光漂白和pH敏感（最佳pH 8~9），避免长时间暴露于酸性缓冲液或强光。

　　蛋白质聚集：若发现管底有沉淀或溶液变浊，可短暂离心（10000g,1min）取上清，但若聚集严重，建议废弃。

　　5、记录与标识

　　每次取用后在瓶身或记录本标注：开瓶日期、取用体积/次数、使用者、剩余体积。

　　定期清理库存（如每3~6个月），过期或性能下降（通过阳性细胞染色变暗、背景升高判断）的抗体及时清理。